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高压蒸汽灭菌是一个可以密闭的容器，由于蒸汽不能逸出，水的沸点随压力增加而提高，因而加强了蒸汽的穿透力，可以在较短的时间内达到灭菌的目的。灭菌的压力和维持时间因灭菌物体的容积和介质而区别。琼脂培养基的灭菌，在121℃、0.1兆帕压力下维持30分钟，如有必要可延长到40-45分钟，木屑、棉壳等固体培养基的灭菌，在128℃，0.15兆帕压力下，维持1-1.5小时，谷粒菌种和经过堆制发酵的粪草培养基，灭菌时间2-2.5小时，有时设置要延长到4小时。具体灭菌所需维持的温度和时间还会因蒸汽灭菌的性能和装料的空隙还有些差别，你可以试试，换出最佳灭菌时间。
另外有一点切记，要把灭菌的冷气放尽，也就是说，开始加温后，锅内温度从常温放气阀，把原锅内冷气，放尽，然后关上放气阀继续加热至128℃，维持1.5-4小时。如果冷气不放尽，原来的冷空气积存在底部。温度计显示的压力和温度是虚假的，影响灭菌效果。
