氟罗沙星胶囊微生物检查方法的研究。氟罗沙星胶囊微生物检查方法的研究 李芳 刘冬玲 刘浩 杨美成 【摘 要】摘要：为建立氟罗沙星胶囊的微生物限度检查方法，本文根据《中国 药典》2015 年版四部通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：
氟罗沙星胶囊微生物检查方法的研究 李芳 刘冬玲 刘浩 杨美成 【摘 要】摘要：为建立氟罗沙星胶囊的微生物限度检查方法，本文根据《中国 药典》2015 年版四部通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法， 通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法和通则 1107 非无菌药 品微生物限度 标准，利用硫酸镁与氟喹诺酮类抗生素的络合作用、聚山梨酯 80 和卵磷脂的中和作用，采用薄膜过滤法测定氟罗沙星胶囊对 5 种试验菌株的 回收率，并对控制菌检查方法进行适用性试验。在对 3 个批次的样品进行需氧 菌总数、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验中，稀释剂对照组菌落数与菌液对 照组菌落数的比值均在 0.5～2 之间，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数与 菌液对照组菌落数的比值均在 0.5～2 之间；在进行控制菌检查方法适用性试验 中，试验组检出阳性试验菌。因此该方法可消除氟罗沙星胶囊的抑菌作用，可 用于氟罗沙星胶囊的微生物限度检查。 【期刊名称】中国抗生素杂志 【年(卷),期】2016(041)006 【总页数】3 【关键词】氟罗沙星胶囊；微生物限度检查；方法适用性试验；络合作用；薄 膜过滤法 分析质控与制剂 氟罗沙星是由日本杏林公司首次合成的第四代喹诺酮类抗生素，对革兰阳性菌、 革兰阴性菌、衣原体、支原体的标准菌株及临床分离株均显示出较强的抗菌活 性[1-2]。氟罗沙星胶囊主要用于对本品敏感细菌引起的呼吸系统感染、泌尿生 殖系统感染、消化系统感染、皮肤软组织感染、骨感染、腹腔感染及盆腔感染 等。根据《中国药典》2015 年版四部微生物限度检查的相关规定，建立微生物 限度检查方法时应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的 微生物限度检查。本文对氟罗沙星胶囊微生物限度检查方法进行研究，并对方 法进行适用性试验，结果表明所确定的检查方法有效、可行。 1 材料 1.1 药品 氟罗沙星胶囊，规格：0.1g，批号 150501，150502，150503，国药集团工 业有限公司。 1.2 仪器 Steritest equinox 集 菌 仪 ( 默 克 密 理 博 有 限 公 司 ) ， 一 次 性 薄 膜 过 滤 器 FC752(浙江泰林生物技术股份有限公司)，恒温培养箱[三洋电机(中国)有限公 司]，BSA 2202S 电子天平[赛多利斯工业称重设备(北京)有限公司]，ESCO MSC Advantage 生物安全柜[赛默飞世尔科技(上海)有限公司]。 1.3 菌种 微 生 物 限 度 检 查 法 用 标 准 菌 株 ： 铜 绿 假 单 胞 菌 (Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104] ； 金 黄 色 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]； 白 念 珠 菌 (Candida albicans)[CMCC(F)98001] ； 黑 曲 霉 (Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]；大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]，均 为实验室保藏。 1.4 试剂 硫酸镁(分析纯)，批号 20120429，江苏永华精细化学品有限公司。使用无菌 0.1%蛋白胨缓冲液作为溶剂。聚山梨酯 80(批号：20151119，上海凌峰化学 试剂有限公司)，卵磷脂[批号：SUVUM-JL，梯希爱(上海)化成工业发展有限公 司]。 1.5 培养基 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号：3302098，广东环凯微生物科技有限公司)； 0.9%无菌氯化钠溶液(批号：20151010，上海凌峰化学试剂有限公司)；胰酪 大豆胨琼脂培养基(批号：4090289)，沙氏葡萄糖琼脂培养基(批号：5091514)， 麦康凯液体培养基(批号：3200272)[碧迪医疗器械(上海)有限公司]，以上均为 符合药典规定的干燥培养基。麦康凯琼脂培养基平板(广东环凯微生物科技有限 公司，批号：E1322Y)，以上为购买的成品培养基。 2 方法和结果 2.1 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪大豆 胨液体培养基中，30℃～35℃培养 18～24h，用 0.9%无菌氯化钠溶液制成不 大于 100cfu/mL 的菌悬液。接种白念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养 基 中 ， 20℃ ～ 25℃ 培 养 2 ～ 3d ， 用 0.9% 无 菌 氯 化 钠 溶 液 制 成 不 大 于 100cfu/mL 和不大于 1000cfu/mL 的菌悬液。 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，20℃～25℃培养 5～7d。 加入 5mL 含 0.05%(mL/mL)聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱。 然后，吸出 1mL 孢子菌液至无菌试管内，用含 0.05%(mL/mL)聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成不大于 100cfu/mL 和不大于 1000cfu/mL 的孢子悬 液[3]。 2.2 供试液的制备 取本品 10g，加入不超过 45℃ 1mol/L MgSO4 溶液至 100mL，混匀，作为 1:10 的供试液。并使用 1mol/L MgSO4 溶液作为稀释液稀释为 1:100 的供试 液。 2.3 微生物计数法适用性试验 试验组：需氧菌总数计数采用薄膜过滤法，取 1:100 的供试液 1mL 加入 45℃ 的 100mL pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(含 1%聚山梨酯 80)中，按照薄膜 过滤法全量过滤后，用 45℃的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(含 1%聚山梨 酯 80)冲洗 9 次，每次 100mL。在最后一次的冲洗液加入含菌量不大于 100cfu 的试验菌液，过滤，取出滤膜以菌面向上贴至直径为 150mm 的胰酪大
